Science

English

Faecal samples from 186 dairy cows representing ten commercial dairy herds with sporadic clinical paratuberculosis (group A), and from 100 dairy cows from herds without a history of paratuberculosis (group B) were cultured for Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP). Two different decontamination methods, a NaOH/oxalic acid method and treatment with 0.75% hexadecylpyridinium chloride (HPC) were performed prior to inoculation of Loewenstein-Jensen agar slants with and without mycobactin. Cultures were incubated for 16 weeks. Acid-fast staining bacteria were identified as MAP on the basis of mycobactin dependency and by PCR-RFLP analysis of the IS1311-insertion element of M. avium. MAP was grown from 15 out of 186 group A animals (8.1%) whereas faecal culture for MAP was consistently negative in group B. The growth rate of MAP was significantly higher (8.1% vs. 1.6%) and the contamination rate of cultures was significantly lower (17.6% vs. 21.5%) in faecal samples decontaminated with NaOH/oxalic acid than with HPC-treated faecal samples (p less than 0.01, McNemar´s test). Atypical mycobacteria which were grown from 46.8% of NaOH/oxalic acid treated specimens were not obtained from any of the HPC-treated samples. A commercial ELISA with MAP-lipoarabinomannan as the antigen was used to detect MAP-antibodies in unabsorbed sera from all animals. The percentage of ELISA-positive cows was 16.8%. Overall agreement between antibody detection and MAP-positive faecal culture was 15.4%.

Keywords: Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis,cattle,diagnosis,culture,serology

Deutsch

Kotproben von 186 Kühen aus zehn Beständen mit sporadischer klinisch manifester Paratuberkulose (Gruppe A) und Kotproben von 100 Kühen aus Beständen ohne anamnestische Hinweise auf Paratuberkulose wurden kulturell auf Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) untersucht. Die Kotproben wurden parallel mit NaOH/Oxalsäure und mit 0.75% Hexadecylpyridiniumchlorid (HPC) dekontaminiert und auf Loewenstein-Jensen Schrägagar mit und ohne Mykobaktin verimpft. Die Kulturen wurden 16 Wochen bebrütet und auf das Wachstum von säurefesten Bakterien untersucht. MAP wurde anhand der Mykobaktinabhängigkeit und durch PCR-RFLP Analyse des IS1311-Insertionselementes identifiziert. MAP wurde aus dem Kot von 15 Tieren der Gruppe A (8.1%) angezüchtet, war hingegen im Kot der Tiere der Gruppe B kulturell nicht nachweisbar. In NaOH/Oxalsäure-dekontaminierten Kotproben war die Nachweisrate von MAP signifikant höher (8.1% vs. 1.6%) und der Anteil kontaminierter Kulturen war signifikant geringer (17.6% vs. 21.5%) als in HPC-dekontaminierten Kotproben (p kleiner als 0.01, McNemar´s test). Atypische Mykobakterien waren in HPC-dekontaminierten Kotproben kulturell nicht nachweisbar, wurden hingegen aus 46.8% der NaOH/Oxalsäure-behandelten Kotproben isoliert. In einem kommerziellen ELISA mit MAP-Lipoarabinomannan als Antigen waren bei 16,8% der 286 Kühe Antikörper gegen MAP nachweisbar. Dabei erbrachten das kulturelle und serologische Nachweisverfahren in 15.4% der Fälle übereinstimmend positive Resultate.

Schlüsselwörter: Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis,Rind,Nachweis,Kultur,Serologie

Français

Des échantillons de selles provenant de 186 vaches issues de 10 exploitations avec des cas cliniques sporadiques de paratuberculose (groupe A) ainsi que des échantillons provenant de 100 vaches issues d´exploitations sans anamnèse de paratuberculose ont été examinés par culture quant à la présence de Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP). Les échantillons ont été décontaminés parallèlement avec NaOH/acide oxalique et avec du chlorure d´hexadecylpyridinium (HPC) et cultivé sur Agar oblique de Loewenstein-Jensen avec ou sans mykobactine. Les cultures ont été incubées durant 16 semaines et examinés quant à la présence de bactéries acido-résistantes. Le MAP a été identifié sur la base de sa dépendance à la mykobactine et par analyse PCR-RFLP de l´élément d´insertion IS1311. Le MAP a été isolé des selles de 15 animaux du groupe A (8.1%) mais dans aucun échantillon du groupe B. Dans les échantillons décontaminés au moyen de NaOH/acide oxalique la mise en évidence de MAP a été nettement plus haute (8.1% contre 1.6%) et le taux de cultures contaminées significativement plus bas (17.6% contre 21.5%) que dans les échantillons décontaminés au HPC. Des mycobactériacées atypiques n´ont pas pu être mis en évidence dans les cultures à base de selles décontaminées au HPC; elles ont par contre été isolées dans 48.6% des cultures issues de selles traitées au NaOH / acide oxalique. Dans un test Elisa utilisant comme antigène le lipoarabinomannane du MAP, 16.8% des 286 vaches présentaient des anticorps contre le MAP.

Italiano

La presenza di Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) è stata esaminata in coltura su campioni di feci di 186 mucche di 10 mandrie con manifestazioni cliniche sporadiche di paratubercolosi (gruppo A) e di 100 mucche di mandrie senza indicazioni anamnestiche di paratubercolosi. I campioni di feci sono stati decontaminati parallelamente con NaOH/acido ossalico e con 0.75% di cetylpyridinium chloride (HPC) e con l´impiego di agar di Loewenstein-Jensen addizionato con mycobactin o senza. Le colture sono state incubate per 16 settimane e esaminate sulla crescita di batteri acido resistenti. Il MAP è stato identificato grazie alla dispendenza al mycobactin e tramite analisi PCR-RFLP dell´elemento inserito IS1311. Il MAP è stato identificato sulle feci di 15 animali del gruppo A (8.1%) mentre nelle feci in coltura del gruppo B non era identificabile. Nei campioni di feci decontaminati in NaOH /acido ossalico la percentuale dimostrata di MAP era chiaramente più alta (8.1% vs. 1.6%) e la percentuale in coltura contaminata era chiaramente inferiore (17.6% vs. 21.5%) che nei campioni di feci decontaminati con HPC (p meno di 0.01, test McNemar´s). La presenza di micobatteri atipici non è stata rilevata nelle colture di campioni di feci decontaminati con HPC mentre, sono state isolate nel 46.8% dei campioni di feci trattati con NaOH / acido ossalico. In un test commerciale ELISA con lipoarabinomannan MAP in quanto antigene sono stati rilevati in 16.8% delle 286 mucche anticorpi contro MAP. In seguito l´esame colturale e serologico ha portato nel 15.4% dei casi risultati positivi conformi.