Science

English

This report describes border disease in a flock of sheep in Switzerland. In April 2001, three ewes in a flock of 41 sheep gave birth to lambs that had generalized tremors and excessively hairy fleece. One of these, a three-week-old female lamb, was referred to our clinic for further diagnostic work-up. The lamb was very nervous, bleated constantly and had generalized muscle tremors, which were more pronounced in the head region. Hind end ataxia was observed, and the lamb was slow to correct its posture when the hind limbs were abducted, adducted or crossed. Blood samples were collected every six weeks to determine antibody titres to pestivirus and for virus isolation via cell culture. A skin biopsy sample was also collected and examined immunohistochemically for pestivirus antigen. Antibody titres in the first tests were suspicious and those of the second were negative. Pesti virus was identified in cell culture, and the skin biopsy sample was positive for pestivirus antigen. Blood samples were collected from all of the ewes and lambs and the buck for virus isolation via cell culture and determination of pestivirus antibody titres. Thirty-one animals were sero-positive, six had borderline antibody titres and four were seronegative. Pestivirus was isolated from eight animals, which included the lamb described in this report. Of the virus-positive animals, three were seronegative, three others had borderline titres and two were seropositive. Six of the eight viruses isolated from cell culture were further characterized genetically via retrotranscription and polymerase chain reaction and subsequent sequencing. The phylogenetic analysis revealed that the causative agent was border disease virus. This is the first time that border disease virus has been isolated in Switzerland. The lamb referred to our clinic was observed for three months; it was then euthanatised and a postmortem examination was performed. Immunohistochemical examination of numerous organs revealed pestivirus antigen. The source of infection was thought to be infected sheep from another flock, which shared a pasture. All antigen-positive animals were slaughtered.

Keywords: sheep,pestivirus,Border disease,virus detection

Deutsch

In der vorliegenden Arbeit wird ein Fall von Border Disease in einem Schafbestand beschrieben. Drei von 30 Mutterschafen hatten im Frühjahr Lämmer zur Welt gebracht, welche zit terten und ein gewelltes Vlies aufwiesen. Eines der Lämmer, weiblich und 3 Wochen alt, wurde deshalb zur weiteren Abklärung in die Klinik eingeliefert. Bei der Untersuchung war das Tier sehr nervös und blökte andauernd. Es zitterte am ganzen Körper, insbesondere am Kopf. Weiter zeigte das Lamm eine Nachhandataxie. Die Ab- und Adduktion sowie das Überkreuzen der Hintergliedmassen wurden verzögert korrigiert. Zur weiteren Abklärung wurden im Abstand von 6 Wochen Blutproben für den Nachweis von Pestivirus-Antikörpern und zur Virusisolierung entnommen. Zudem wurde eine Hautbiopsie immunhistochemisch auf Pestivirus-Antigen untersucht. Die erste serologische Untersuchung auf Pestivirus-Antikörper war verdächtig, die zweite war negativ. Bei der Virusisolierung wurde in der Zellkultur ein Pestivirus nachgewiesen, und auch die Hautbiopsie erwies sich als Antigen-positiv. Um das Vorhandensein der Border Disease in der Herde nachzuweisen, wurden bei allen Mutterschafen, den Jungtieren und dem Bock Blutproben für den Pestivirus-Antikörper-Nachweis und die Virusisolierung entnommen. 31 Schafe waren serologisch positiv, bei sechs Tieren lag der Antikörpertiter im Grenzbereich zwischen positiv und negativ, und vier Tiere waren serologisch negativ. Von acht Tieren wurden Pestiviren isoliert (inkl. Lamm). Drei der Virus-positiven Tiere waren serologisch negativ, drei wiesen ein Resultat im Grenzbereich auf, und zwei Tiere waren serologisch positiv. Sechs der insgesamt acht Viren, welche von den Tieren dieser Herde in Zellkultur isoliert wurden, konnten zusätzlich mittels Retrotranskription, Polymerase-Kettenreaktion und anschliessender Sequenzierung genetisch charakterisiert werden. Die phylogenetische Analyse ergab, dass es sich um Border-Disease-Viren handelte. Damit wurde in der Schweiz das Border-Disease-Virus erstmals isoliert. Das an die Klinik eingelieferte Lamm wurde nach 3-monatiger Beobachtung euthanasiert und seziert. In zahlreichen immunhistologisch untersuchten Organen wurde Pestivirusantigen nachgewiesen. Aufgrund der weiteren Abklärungen bestand der Verdacht, dass sich die Schafe beim gemeinsamen Weidegang mit infizierten Tieren eines anderen Betriebes angesteckt hatten. Alle Antigen-positiven Tiere wurden geschlachtet.

Schlüsselwörter: Schaf,Border Disease,Virusnachweis

Français

Un cas de border disease dans un troupeau de moutons est décrit dans ce travail. Trois parmi trente brebis ont mis bas au printemps des agneaux qui tremblaient et qui avaient une toison ondulée. Une des agnelles âgée de trois semaines a été présentée à la clinique pour préciser le diagnostic. Au cours de l´examen, l´animal était nerveux et bêlait constamment. Tout le corps tremblait, en particulier la tête. De plus, une ataxie des membres postérieurs était présente. L´abduction et l´adduction ainsi que le croisement des membres postérieurs étaient corrigés plus lentement que normal. Des échantillons de sang ont été prélevés avant et après un intervalle de 6 semaines pour démontrer la présence d´anticorps contre les Pestivirus et pour isoler le virus. De plus, une biopsie de la peau a été examinée au moyen d´immunohistochimie afin de détecter l´antigène du Pestivirus. Le résultat du premier examen sérologique pour les anticorps conte le Pestvirus était douteux alors que le deuxième s´est avéré négatif. Un Pestivirus a été isolé au moyen d´une culture de cellules et la biopsie de la peau était positive pour l´antigène. Afin de démontrer la présence de border disease au sein du troupeau, des echantillons de sang ont été prélevés chez les brebis, les jeunes animaux et le bélier pour démontrer la présence d´anticorps contre le Pestivirus ainsi que pour l´isolation de virus. 31 moutons étaient sérologiquement positifs alors que chez 6 animaux le titre des anticorps se trouvait dans la zone limite positive/négative et que quatre animaux avaient un titre négatif. Des Pestivirus ont été isolés de huit animaux (y compris les agneaux). Trois des animaux porteurs du virus avaient un titre négatif, trois avaient un résultat dans la zone limite et deux avaient un titre positif. Six des huit virus qui ont été isolés des animaux par culture de cellules ont pu être caractérisés génétiquement par rétrotranscription, réaction en chaine de la polymérase et ensuite par analyse de séquence. L´analyse phylogénétique a démontré qu´il s´agissait de virus du border disease. Ainsi le virus du border disease a été isolé pour la première fois en Suisse. L´agneau présenté à la clinique a été euthanasié et autopsié après trois mois d´observation. Des antigènes du Pestivirus ont été détectés dans de nombreux organes. Sur la base d´observations supplémentaires, il a été soupconné que les moutons ont été infectés en pâture cornmune avec des animaux porteurs d´une autre exploitation. Tous les animaux séropositifs ont été abattus.

Italiano

In questo studio viene descritto un caso di Border disease in una mandria di pecore. In primavera tre pecore madri su 30 avevano partorito agnelli colpiti da tremore e con vello ondulato. Uno degli agnelli, una femmina di 3 settimane, è stato ricoverato in clinica per gli accertamenti del caso. Durante la visita veterinaria l´animale era nervoso e belava in continuazione. Tutto il corpo, e specialmente la testa, tremava. Inoltre nell´agnello è stata riscontrata un´atassia del treno posteriore. L´abduzione e l´adduzione come pure l´incrociare delle zampe posteriori venivano corretti con ritardo. Per accertare la presenza di anticorpi contro il Pestivirus e per isolare il virus stesso sono stati prelevati a di stanza di 6 settimane dei campioni di sangue. Il primo esame serologico riguardante la ricerca di anticorpi contro il Pestivirus è risultato sospetto, il secondo negativo. L´isolazione del virus ha dimostrato la presenza di Pestivirus nella coltura cellulare, ed anche la biopsia della pelle è risultata positiva all´antigene. Per provare la presenza del Border disease nella mandria, sono stati eseguiti dei prelievi di sangue per l´accertamento degli anticorpi contro il Pestivirus e per l´isolazione del virus in tutte le pecore madri, negli animali giovani e nel montone. Trentuno pecore sono risultate serologicamente positive, in sei animali il tasso di anticorpi era al limite tra negativo e positivo, e quattro animali sono risultati serologicamente negativi. In otto animali (compresi gli agnelli) il Pestivirus è stato isolato. Tre degli animali nei quali il Pestivirus è stato isolato erano serologicamente negativi, altri tre erano al limite, e due erano positivi. Il Pestivirus di sei degli otto animali nei quali il virus è stato isolato tramite coltura cellulare ha potuto essere caratterizzato geneticamente tramite retrotra scrizione, reazione a catena polimerasi e la sequenza del virus ha potuto essere eseguita. Dall´analisi filogenetica è risultato che si trattava del virus responsabile del Border disease. Quindi è la prima volta che in Svizzera è stato isolato il virus del Border disease. L´agnello ricoverato in clinica è stato addormentato dopo tre mesi di osservazione e sezionato. In diversi organi esaminati immunoistologicamente è stata accertata la presenza di antigene di Pestivirus. Chiarificazioni seguenti hanno fatto nascere il sospetto che le pecore fossero state infettate da animali infetti di un´altra aziende durante il pascolo in comune. Tutti gli animali positivi all´antigene sono stati macellati.