| Journal | Schweiz Arch Tierheilkd | |
| Verlag | GST | |
| Heft | Band 153, Heft 11, November 2011 |
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| Thema | Zum 60. Geburtstag von Prof. Dr. Ueli Braun | |
| ISSN (print) | 0036-7281 | |
| ISSN (online) | 1664-2848 | |
| online seit | 01 November 2011 |
Wissenschaft | Science
In vivo induction of interferon gamma expression in grey horses with metastatic melanoma resulting from direct injection of plasmid DNA coding for equine interleukin 12
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English
In vivo induction of interferon gamma expression in grey horses with metastatic melanoma resulting from direct injection of plasmid DNA coding for equine interleukin 12Whole blood pharmacokinetics of intratumourally injected naked plasmid DNA coding for equine Interleukin 12 (IL-12) was assessed as a means of in vivo gene transfer in the treatment of melanoma in grey horses. The expression of induced interferon gamma (IFN-g) was evaluated in order to determine the pharmacodynamic properties of in vivo gene transduction. Seven grey horses bearing melanoma were injected intratumourally with 250 µg naked plasmid DNA coding for IL-12. Peripheral blood and biopsies from the injection site were taken at 13 time points until day 14 post injection (p.i.). Samples were analysed using quantitative real-time PCR. Plasmid DNA was quantified in blood samples and mRNA expression for IFN-g in tissue samples. Plasmid DNA showed fast elimination kinetics with more than 99 % of the plasmid disappearing within 36 hours. IFN-g expression increased quickly after IL-12 plasmid injection, but varied between individual horses. Intratumoural injection of plasmid DNA is a feasible method for inducing transgene expression in vivo. Biological activity of the transgene IL-12 was confirmed by measuring expression of IFN-g.
Keywords: melanoma,horse,immune therapy,DNA transfection,real-time PCR
Deutsch
Die Pharmakokinetik intratumoral injizierter nackter Plasmid DNA kodierend für equines Interleukin 12 (IL-12) wurde im Blut von Schimmeln mit Melanomen bestimmt um den in vivo Gentransfer durch diese Behandlung zu ermitteln. Zur Untersuchung der pharmakodynamischen Eigenschaften wurde die Expression von induziertem Interferon gamma (IFN-g) quantifiziert. Sieben Schimmeln mit natürlich vorkommenden Melanomen wurden intratumoral 250 µg nackte Plasmid DNA kodierend für IL-12 injiziert. Vollblut und Biopsien aus der Injektionsstelle wurden zu 13 Zeitpunkten bis zum Tag 14 post injectionem entnommen. Die Proben wurden mittels quantitativer real-time PCR untersucht. Die Plasmid DNA wurde im Vollblut und die mRNA Expression des IFN-g in den Gewebeproben quantifiziert. Plasmid DNA zeigte eine rasche Elimination aus dem Blut. Nach 36 Stunden waren weniger als 1 % der Plasmid DNA im Blut nachweisbar. Die IFN-g-Expression stieg innerhalb kurzer Zeit nach der Plasmid-Injektion an, war aber individuell unterschiedlich. Die intratumorale Injektion von Plasmid DNA ist eine praktikable Methode zur in vivo Induktion transgener Expression. Die biologische Aktivität des transgenen IL-12 wurde durch den Nachweis der Induktion einer IFN-g Expression belegt.
Schlüsselwörter: Melanom,Pferd,Immuntherapie,DNA Transfektion,real-time PCR
